小鼠Treg流式染色结果求助

一、小鼠Treg流式染色结果求助

这是个专业性非常强的东西,没有做过.

二、用流式细胞仪分析细胞转染效率的原理是什么

转染的质粒带有标记基因，比如EGFP。分析绿色细胞的比例就得到了转染效率了。

三、请教流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理

博凌科为解答:PI ,即碘化丙锭,可以与细胞内DNA 和RNA 结 合,采用RNA 抑制剂将RNA 消化后,通过流式细胞术检测 到的与DNA 结合的PI 的荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常 正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA 含量(2N) ,而 G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S 期的DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。因此,通过流式细胞术PI 染色法对细胞内DNA 含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/ G0 期,S 期和G2/ M 期,并可通过特殊软件 计算各时相的百分率。值得注意的是, PI 不能通过细胞膜完整的细胞(如活细胞和早期凋亡细胞) ,在标本制备时,必 须先用乙醇或其他破膜剂增强细胞膜的通透性,才能使PI 进入细胞内与细胞内的核酸结合。乙醇通常为终浓度为 70 %的冷乙醇。

四、流式检测细胞周期都有哪些染色方法

从分类上来说，一般有两类：第一类是只染DNA。这类方法比较简单，用酒精固定细胞后，直接加含有RNA酶的荧光染料，比如PI等，然后就可以直接上机。

第二类另外加了一个步骤，在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物，比如BrdU或者EdU。细胞新合成的DNA上就会有这些物质。在不同时间点收集细胞，用DNA染料染DNA的同时，还以用抗体或者化学发光法染核苷酸模拟物也发荧光。这个方法的有点就是不仅可以像第一类方法一样，看到处于细胞周期各个期的百分率，另外还可以看到有多少DNA是新合成的。是一个动态的过程。

五、流式法检测细胞凋亡时怎样体调补偿

流式细胞检测凋亡的原理和染色方法有好多种呢，有的只要单色，不需要设置补偿。

只有使用PI+Anexin V 这种双色实验才需要。不过这个实验特异性很差，不建议使用，因为健康细胞结果刮取或者胰酶消化后很容易出现假阳性。

调节补偿，和其他多色流式的方法一样，需要一管无染色，一管肯定有PI阳性的，一管肯定有Anexin V阳性的，分别做相应的染色。再上机调节。特别要注意的是很多人用健康细胞来做这个调节，但是健康细胞是不会被染色的，所以一定要使用确定死亡和正在发生凋亡的细胞来做调节补偿的单色阳性对照